激光掃描共聚焦顯微鏡工作原理

更新時(shí)間：2019-03-01

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激光掃描共聚焦顯微鏡是近代生物醫(yī)學(xué)圖象儀器。它是在熒光顯微鏡成象的基礎(chǔ)上加裝激光掃描裝置，使用紫外光或可見(jiàn)光激發(fā)熒光探針。是利用計(jì)算機(jī)進(jìn)行圖象處理，從而得到細(xì)胞或組織內(nèi)部微細(xì)結(jié)構(gòu)的熒光圖象，以及在亞細(xì)胞水平上觀察諸如Ca2+、pH值、膜電位等生理信號(hào)及細(xì)胞形態(tài)的變化。

激光掃描共聚焦顯微鏡工作原理

激光掃描共聚焦顯微鏡的主要原理是利用激光掃描束通過(guò)光柵針孔形成點(diǎn)光源，在熒光標(biāo)記標(biāo)本的焦平面上逐點(diǎn)掃描，采集點(diǎn)的光信號(hào)通過(guò)探測(cè)針孔到達(dá)光電倍增管(PMT)，再經(jīng)過(guò)信號(hào)處理，在計(jì)算機(jī)監(jiān)視屏上形成圖像。對(duì)于物鏡焦平面的焦點(diǎn)處發(fā)出的光在針孔處可以得到很好的會(huì)聚，可以全部通過(guò)針孔被探測(cè)器接收。而在焦平面上下位置發(fā)出的光在針孔處會(huì)產(chǎn)生直徑很大的光斑，對(duì)比針孔的直徑大小，則只有極少部分的光可以透過(guò)針孔被探測(cè)器接收。而且隨著距離物鏡焦平面的距離越大，樣品所產(chǎn)生的雜散光在針孔處的彌散斑就越大，能透過(guò)針孔的能量就越少（由10%到1%，慢慢接近為0%），因而在探測(cè)器上產(chǎn)生的信號(hào)就越小，影響也越小。正由于共焦顯微僅對(duì)樣本焦平面成像，有效的避免了衍射光和和散射光的干擾，使得它具有比普通顯微鏡更高的分辨率，并在生物學(xué)中獲得了廣泛的應(yīng)用。

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激光掃描共聚焦顯微鏡工作原理